Teknik Pemeriksaan Infeksi Parasit Metode Serologis

Teknik yang lazim dipakai dalam bidang parasitologi serta pengetahuan tentang siklus suatu parasit telah difahami dengan baik, maka sebenarnya tidak ada kesulitan yang dapat dijumpai dalam menegakkan diagnosis penyakit parasit . Namun cara-cara menegakkan diagnosis secara metode yang konvensional, seringkali kita tidak dapat mendeteksi adanya parasit di dalam tubuh pada tahap yang paling dini. Secara miknoskopik pun tidak selamanya kita dapat menemukan parasit yang dimaksud, dan seringkali terlalu banyak membuang waktu untuk mencari ada-tidaknya parasit di dalam tubuh.¹

Dengan adanya fakta-fakta ini, maka berkembang pengetahuan imunologik dalam bidang parasitologi untuk kepentingan diagnostik. Bagaimanapun bentuk dan akibat respons imunitas yang terjadi, seperti yang diutarakan, maka ada sifat-sifat sistem imunologik yang hakiki, yaitu "specificity" dan "memory", artinya : respons imunologik yang timbul itu sifatnya spesifik dan hanya dapat bereaksi dengan antigen penginduksinya serta mempunyai 'daya ingat' terhadap antigen mana respons imun itu telah bangkit. Dua hal inilah yang dijadikan pegangan oleh para ahli imunologi dalam mempergunakan respons imunologik untuk mendiagnosis penyakit-penyakit parasit.²

Pada dasarnya, respon imunologik hospes terhadap infeksi parasit ditentukan oleh dasar-dasar yang sama dengan respon terhadap agen infeksi lain, tetapi untuk infeksi parasit melibatkan interaksi  parasit-hospes yang lebih rumit. Meskipun parasit merupakan agen penyakit pertama yang dipelajari, lebih banyak minat pada gambaran morfologi, uraian daur hidup, penelitian mekanisme penularan dan perkembangan agen-agen kemoterapi baru. Meskipun banyak kemajuan dalam pencegahan dan pengendalian penyakit parasit tetapi kemajuannya tidak seimbang dengan agen penyakit lainnya. Perkembangan yang lambat dalam imunoparasitologi disebabkan oleh beberapa faktor diantaranya; pertama: kesulitan membiakan agen invitro, bukan hanya karena terbatasnya  antigen untuk analisis, tetapi juga rumitnya daur hidup dan spesifisitas hospes yang ketat, dan terbatasnya model percobaan infeksi  dan imunitas. Yang kedua: kerumitan daur hidupnya membuat rangsangan antigenik multifasik pada hospes dan terjadi bermacam-macam respon imun. Ditambah lagi  kurangnya keberhasilan dalam mengembangkan strain yang dilemahkan yang cocok untuk imunisasi seperti yang dilakukan pada  bidang  mikrobiologi lainnya (bakteriologi dan virologi). Yang ketiga : kurangnya pengertian terhadap susunan dan fungsi genetic dari eukariotik yang rumit dan kurangnya hubungan antara ahli parasitologi dan imunologi telah menghalangi perkembangan imunoparasitologi.³

Pendekatan serologis untuk pemeriksaan penyakit parasit adalah paling banyak digunakan ketika teknik  yang lebih mendalam dari pemeriksaan rutin seperti darah, faeces,atau cairan tubuh lainnya diperlukan untuk menetapkan diagnosa. Sebagai contoh infeksi yang disebabkan oleh parasit toxoplasma, amoeba  diluar saluran pencernaan, thricinosis dan sistiserkosis yang biasanya masuk ke dalam organ dan jaringan. Dimana diperlukan penyelidikan di organ lebih dalam bahkan harus membuka organ melalui pembedahan/biopsi jaringan. Pada beberapa kasus, pemeriksaan serologis dapat digunakan setelah mempertimbangkan beberapa faktor penting sebagai patokan dari Garsia meliputi beberapa pertimbangan , yaitu:

1.      Parasit  yang secara pasti melalui beberapa fase perkembangan kemungkinan tidak cukup  konstan atau terus menerus menyediakan rangsangan antigenik untuk pembentukkan antibody

2.      Kurangnya respon antibodi, yang kemungkinan bisa disebabkan oleh keterbatasan rangsangan antigenik atau karena  antigen yang tersedia pada  system pengujian tidak sesuai

3.      Antigen yang digunakan  dan ditetapkan untuk pemeriksaan   tersedia dalam campuran antigen atau bentuk ekstrak parasit yang heterogen. Sehingga pada pada reagen  seperti itu  dapat menunjukkan reaksi silang, yang akan menyulitkan  dalam interpretasi hasil atau sensitifitasnya tidak adekuat

4.      Untuk  pasien yang  tinggal pada daerah endemic harus memiliki  dasar titer antibody yang lebih tinggi dibandingkan dengan daerah lainnya, apabila memungkinkan  perubahan pada titer ditentukan secara pasti.

5.      Pengujian yang dapat dipercaya untuk keseluruhan pemeriksaan seringkali tidak tersedia secara komersial. Kalaupun ada biasanya angka kejadian penyakit parasit sangat kecil pada kebanyakan laboratorium sehingga reagen akan ketinggalan zaman yang disebabkan karena jarangnya pemeriksaan di lakukan.

Yang menarik dari metode pemeriksaan parasit selama kurang lebih lima tahun terakhir ini adalah diperkenalkannya teknik pemeriksaan untuk  mendeteksi antigen dan antibodi pada darah dan cairan tubuh lainnya. Teknik pemeriksaan tersebut diantaranya menggunakan enzim (Enzyme immunoassays/EIAs), hambatan hemaglutinasi tidak langsung (Inditect haemaglutination  inhibition/IHA), pemeriksaan flouresen langsung dan tidak langsung, serta metode fiksasi ikatan komplemen. Untuk pengembangan teknik pemeriksaan parasit  yang lebih maju biasa digunakan di rumah sakit atau  laboratorium rujukan untuk pemeriksaan parasit yaitu penggunaan metode biologi molekuler.

Semangat yang besar dalam menciptakan evolusi untuk pemeriksaan laboratorium, harus juga mempertimbangkan kenyataan hal-hal yang dikemukakan oleh Weiss. Pertimbangan itu difokuskan pada pemeriksaan terbaru  yang digunakan di laboratorium penelitian, bagaimanapun seperti yang dikemukaan oleh Weiss, sangat sedikit dari teknik-teknik terbaru  telah melalui percobaan  klinik dalam skala besar. Penggunaan praktis PCR sebagai contoh, PCR menampilkan sensitifitas dan spesifisitas yang besar dalam pemeriksaan DNA, yang merupakan hasil dari  sinyal peningkatan produksi dari ribuan kali replikasi dari  sekuen DNA target  spesifik yang disalin. Hal ini akan memungkinkan dengan cepat  identifikasi antigen yang dicari secara langsung  dilakukan walaupun dalam konsentrasi/kadar yang sangat rendah. Bagaimanapun teknik PCR yang sementara ini hanya tersedia pada sebagian laboratorium klinik, hal ini disebabkan oleh teknik tersebut merupakan teknik dengan biaya yang mahal dan memerlukan tenaga terlatih. Selain itu fasilitas laboratorium yang harus terpisah-pisah dalam menangani pemeriksaan  specimen untuk menghindari kontaminasi dari lingkungan terhadap ekstrak DNA yang diperiksa. Biaya yang tinggi, kebutuhan akan tenaga yang terlatih secara khusus, keperluan akan reagen serta peralatan  yang khusus, akan menghambat penggunaan PCR secara luas di negara-negara berkembang. Bagaimanapun  suatu hari disaat penggunaan teknik  amplifikasi biasa digunakan di banyak laboratorium dalam waktu dekat, teknik ini bukan hanya sebagai teknik diagnosa dini penyakit parasit pada manusia tapi menyediakan kesempatan untuk mempelajari vektor pembawa penyakit, sebagai upaya pencegahan penyakit parasit melalui penanggulangan vektor secara efektif. Dengan sistem yang otomatis, tekanan  kebutuhan pasar, teknik yang canggih dan kebutuhan akan perubahan diagnosa penyakit parasit  secara  lebih cepat adalah merupakan hal-hal yang akan membawa teknik biologi molekular ini digunakan di laboratorium.⁴

Fungsi utama daripada system imun adalah pengenalan antigen  asing (recognition) dan menjaga tubuh dari serangan benda-benda asing tersebut. Sekali system imun telah dibangkitkan terhadap suatu antigen, akan tetap mengenali antigen tersebut, seolah-olah mempunyai daya ingat (memory). Imunitas bersifat spesifik, artinya system imun tidak akan  protektif terhadap mikroorganisme yang keantigenannya berbeda sama sekali. Kekebalan  dapat terjadi secara alamiah (natural immunity) dan didapat (acquired immunity). Kekebalan alamiah  atau bawaan terjadi karena hal-hal yang non-spesifik, yaitu kulit dan selaput lendir sebagai pelindung, fagositosis. Kekebalan alamiah juga dipengaruhi faktor  genetik, sebagai contoh manusia dan kera resisten terhadap Trypanosoma brucei, bangsa negro lebih resisten terhadap Plasmodium vivax dan cacing kait daripada kulit putih. Sifat parasit  yang menentukan dalam kekebalan adalah apakah parasit itu uniseluler atau multiseluler, stadium dari parasit dan struktur antigen yang kompleks dari parasit terutama multiseluler.

Sistem imunitas spesifik dapat dibagi atas dua bagian, yaitu sistem imunitas humoral dan sistem imunitas seluler. Sistem imunitas humoral dibawakan oleh sel limfosit-B yang pematangannya berada dibawah pengaruh "bursa of Fabricius" (pada burung) atau "Gut Associated Lymphoid Tissues" (GALT) pada mamalia. Apabila sel limfoid-B terstimulasi oleh suatu antigen asing, maka ia akan berdeferensiasi menjadi sel plasma yang akan mensekresi antibodi . Sebaliknya, sistem imunitas seluler dibawakan oleh sel limfosit-T yang pematangannya berada dibawah pengaruh kelenjar timus ("thymus"). Dibawah mikroskop cahaya biasa, maka kedua macam sel limfosit ini tidak dapat dibedakan, namun dewasa ini telah dapat dibuktikan bahwa baik sel limfosit-T maupun sel limfosit-B mempunyai karakteristik, sifat . dan fungsi yang berbeda. Bila berkontak dengan antigen asing, maka sel limfosit-T akan berdeferensiasi menjadi "specifically sensitized lymphocyte cell" (SSLC) yang secara spesifik akan menghasilkan suatu zat yang dinamakan limfokin ("lymphokines"). Aktivitas antibodi, yang berfungsi menetralkan atau menggumpalkan antigen asing, dibawakan oleh suatu molekul protein yang dewasa ini dikenal dengan nama immunoglobulin (disingkat Ig). Strukturnya terdiri atas empat rantai polipeptida, dua rantai dengan untaian asam amino yang pendek, sedangkan dua rantai lainnya dengan untaian yang panjang, masing-masing dikenal dengan nama : rantai-L ("light") dan rantai-H ("heavy"). Keempat rantai polipeptida ini dihubungkan satu dengan lainnya oleh ikatan disulfide dan ikatan non-kovalen. Sebagian daripada susunan asam amino pada keempat rantai ini adalah variabel, sedangkan sebagian lagi konstan. Gabungan bagian yang variabel penting sekali karena menentukan spesifisitas daripada aktivitas antibodi terhadap suatu antigen asing penginduksinya, bagian ini dikenal dengan istilah Fab (antibody binding Fragment" ). Bagian konstan daripada dua rantai-H yang disebut Fc ("crystalizable Fragment") mempunyai fungsi yang berlainan dan menentukan aktivitas biologik suatu kelas imunoglobulin. Berdasankan bagian Fc inilah, maka molekul imunoglobulin dibagi atas lima kelas, yaitu : IgG, IgM, IgA (sebagai " secretory IgA"), IgD dan IgE.²

Respon imunologik yang  ditimbulkan oleh infeksi parasit dapat bersifat spesifik terhadap spesies yang bersangkutan  atau dapat bereaksi silang terhadap spesies lain. Respon imun sangat kompleks dan tidak semua bersifat menguntungkan terhadap hospes, yang menguntungkan maka akan terjadi kekebalan, tetapi yang tidak menguntungkan akan memperberat penyakit, misalnya reaksi granuloma pada schistosomiasis dan syok anafilaktik yang disebabkan oleh pecahnya kista hidatid atau kelainan ginjal pada malaria. Kadang-kadang parasit tidak menimbulkan kekebalan karena kemampuan parasit untuk menyamar sebagai sendiri (self) dengan menggunakan protein hospes untuk metabolismenya.

Imunoassay merupakan salah satu teknik imunodiagnostik paling banyak digunakan. Teknik ini berdasarkan reaksi kimia antara dua jenis analit (antigen dan antibodi) yang dapat rnemberi hasil bervariasi bergantung indikatornya. Sebagai indikator biasanya digunakan bahan radioaktif, biasanya yodium 125 (radioimmunoassay/RIA), sistim enzim -substrat tertentu seperti peroksidase-kloronaftol, fosfatase-bromo-kloro-indolinfosfat, zat golongan fluorokrom atau fluoresen